Care este scopul purificării produsului PCR?

2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. Modificat ultima dată: 2023-12-15 23:40

Purificarea de ADN de la a PCR reacția este de obicei necesară pentru utilizarea în aval și facilitează îndepărtarea enzimelor, nucleotidelor, primerilor și componentelor tampon. În mod tradițional, acest lucru a fost realizat folosind metode de extracție organică, cum ar fi extracția cu fenol cloroform, urmată de precipitarea cu etanol.

De asemenea, întrebarea este, de ce este necesară purificarea produselor PCR?

Trebuie să purifica produsele PCR pentru a scăpa de primeri, nucleotide și enzime neutilizate pentru a optimiza succesul ligării, care va menține și secvenționa produs de PCR . La purifica cel produse PCR , se utilizează cromatografia de excludere a mărimii.

În plus, ce ar trebui să fac după PCR? Pentru a maximiza recuperarea, clătiți cupa de retentat de două ori cu 10 până la 20 µL TE sau apă. Finala PCR reacția poate conține până la un microgram de ADN amplificat care poate fi utilizat pentru o varietate de aplicații de biologie moleculară. Aceste aplicații pot fi mai mult sau mai puțin sensibile la componentele reziduale ale PCR amestec de reacție.

Se poate întreba, de asemenea, cum curățați produsele PCR?

Metodele clasice folosite pentru curat sus produse PCR înainte de secvențiere includ electroforeza pe gel, precipitarea cu etanol și cromatografia pe coloană. Deși sunt destul de eficiente, aceste metode pot deveni rapid greoaie atunci când procesează mai multe probe în paralel și prezintă grade diferite de pierdere a probei.

De ce trebuie curățat ADN-ul?

Noi curat sus ADN din soluții apoase pentru a îndepărta sărurile tampon, enzimele sau alte substanțe care ar putea afecta aplicațiile din aval. Exemplele includ reacția PCR curat sus, curat sus după digerări de restricţie şi curat de genomic sau plasmid ADN contaminate cu proteine/resturi celulare.